1. 参考资料：

1.1  GB 19489-2008 《实验室生物安全通用要求》

1.2 《美国食品微生物学检验方法汇编》（第四版）

2. 环境：

2.1 在实验室入口处设置生物危险标示；

2.2 工作前后用消毒液（例如：70%酒精）对工作台面进行消毒；

2.3 定期使用消毒液（例如：1000ppm次氯酸钠）对地板及所有工作台面进行消毒；

2.4 定期清洁墙面，如墙面有可见污物时，及时进行清洁和消毒灭菌；

2.5 每天下班后开紫外灯消毒空气；

2.6 定期检查空气质量，如果计数结果不在接受范围，需要查明并消除污染原因； 

2.7 实验室内要经常保持清洁卫生，每天上下班应进行清扫整理，保持井然有序，不得存放实验室外及个人物品、仪器等，实验室用品要摆放合理，并有固定位置。

3．培养基、水、玻璃容器、设备的清洁和灭菌

3.1 培养基使用前应进行高压灭菌（根据使用说明）；

3.2 所有玻璃容器、设备及移液管在用于测试前需在121摄氏度下高压灭菌15分钟；

3.3 水在用于测试前需要去离子并在121摄氏度下高压灭菌15分钟；

3.4 每一次高压灭菌其过程都要使用颜色指示卡进行有效确认；

3.5 种环/针在使用前后需要用火焰烧进行仔细灭菌；

3.6 玻璃容器、设备在使用后需使用洗涤剂进行清洗，使用后的移液管应用次氯酸钠浸泡过夜；

3.7 定期清洁实验室设备。

4．人员：

4.1 只有授权人员才能进入微生物实验室；

4.2 实验室内禁止吸烟、饮食、存放食品；

4.3 进入实验室前需穿干净的工作服、头套、口罩及换鞋子。进入洁净室则需要穿洁净服，包括衣服、头套、口罩及鞋子；

4.4 进入和离开实验室时要用消毒洗手液洗手，经常使用消毒洗手液洗手；

4.5 被污染的实验服必须进行高压灭菌；

4.6 戴手套工作，每当污染、破损或戴一定时间后，更换手套；每当操作危险性材料的工作结束时，除去手套并洗手；离开实验间前，除去手套并洗手。严格遵守洗手的规程;不要清洗或重复使用一次性手套；

4.7 如果有可能发生微生物或其他有害物质溅出，要佩戴防护眼镜；

4.8 只有授权人员才能使用液氮罐，授权人员在使用液氮罐时必须戴上厚的橡皮手套并遵守“液氮使用注意事项”内所定之规条；

4.9 如在工作时有损伤，要马上清洗伤口及涂消毒药水，并用止血贴封好；如手部有未愈合的旧伤口，在工作前先要用药贴封好；

4.10 洁净工作服装、鞋应每周清洁消毒及每天紫外线消毒。每周将换洗的白色工作服及清洗晾干，之后用紫外线消毒半小时。

5. 安全操作

5.1 安全使用移液管，要使用机械移液装置；

5.2 使用锐器时要注意：不要试图弯曲、截断、破坏针头等锐器；使用过的锐器要置于专用的搪瓷容器里，不要超过规定的盛放容量；不要试图直接用手处理打破的玻璃器具，要用镊子或其他合适工具处理；

5.3 按规程小心操作，避免发生溢洒或产生气溶胶，如不正确的移液操作等。在生物安全柜中进行所有可能产生感染性气溶胶或飞溅物的操作；

5.4 发生危险材料溢洒后，及时使用适当的消毒灭菌剂对工作表面和被污染处进行处理：

5.4.1 溢洒区域的处理:

-  所有溢出的传染性物质使用消毒灭菌剂(如1000ppm次氯酸钠）沾湿的纸巾覆盖溢洒物，并戴上手套清理。小心从外围向中心倾倒适当的消毒灭菌剂，使其与溢洒物混合并作用一定时间, 应注意按消毒灭菌剂的说明确定使用浓度和作用时间（如1000ppm次氯酸钠作用半小时）。

-  到作用时间后，小心将吸收了溢洒物的纸巾连同溢洒物收集到专用的收集袋或容器中，反复用新的纸巾（或其他吸收材料）将剩余物质吸净。破碎的玻璃或其他锐器要用镊子处理。用消毒灭菌剂清洁被污染的表面。所处理的溢洒物以及处理工具全部置于专用的收集袋或容器中并封好, 所有已污染的溢洒物、处理工具及实验用品在清洁或抛弃前须先进行高压灭菌；

5.4.2 生物安全柜内溢洒的处理:

- 处理溢洒物时不要将头伸入安全柜内，不要将脸直接面对前操作口，应处于前视面板的后方；

- 处理时使生物安全柜保持开启状态；

- 其他程序同上。

5.5 严格按照仪器的操作说明来使用，以免发生事故； 

5.6 使用高压灭菌锅前要检查排水阀是否拧紧，水是否加足；在高压灭菌前，应拧松被灭容器的盖子以防容器爆裂；在整个灭菌过程中须有工作人员监视；离开实验室之前应确保关闭高压灭菌锅电源；高压灭菌锅属压力容器，存在一定的潜在危险，应定期检查并填写使用记录；

5.7 在使用酒精灯及95%酒精消毒时要分外小心，以防把酒精点燃或打翻酒精灯；使用酒精灯时，注意酒精切勿装满，应不超过容量的2/3，灯内酒精不足1/4容量时，应灭火后添加酒精；

5.8 在用紫外灯灭菌时，避免眼睛和皮肤与紫外线直接接触, 并在门上加上标示说明“紫外灯开时，不能入内，如有需要，关灯后进入”；

5.9存放标准菌株的冰箱或液氮罐应有生物危险标示，并且要上锁。只有授权人员方可拿取；

5.10 实验中所用仪器、药品放置要合理、有序，实验台面要清洁、整齐；

5.11 实验工作结束或暂告一段落时，即时清理现场和实验用具，仪器、试剂、各种用品应放回原处,对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理；

5.12 实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。

6．废弃物处理

6.1 用普通废物带收集塑料或纸制品等非危险性废物；

6.2 用专用的耐高压蒸汽消毒灭菌的塑料袋收集任何具有生物危险性或有潜在生物危险的废物；

6.3 用专用的搪瓷容器收集带针头的注射器、破玻璃、刀片等锐利性废弃物；

6.4 所有已被污染的的生物废物及实验用品在清洁或抛弃前需高压灭菌（121度灭30分钟）；

6.5 随时保持实验室卫生，不得乱扔纸屑等杂物，实验垃圾应及时清理, 洁净室不设垃圾桶；

6.6 在洗消室内工作时需要带围裙及袖套，且围裙及袖套未经清洁消毒不得带到其他工作区域；

6.7 已灭菌处理的生物废弃物先放在塑料袋中密封好，然后放在专用的垃圾桶(有盖子)中，再用实验室专用推车将其运到实验室门口，交给清洁员。垃圾桶和推车为微生物实验室专用，需定期清洁和消毒。

7．能源检查

离开实验室前认真检查水电，关闭不使用的设备电源，关闭所有的照明灯、水龙头、门。