实验员在做分子生物学实验的时候，难以避免的问题就是污染问题，尤其在进行PCR实验的时候，一小点点污染就会影响检验结果的准确性，这让很多实验室人员焦头烂额。

一、关于气溶胶污染

在PCR实验中，其中一个问题就是气溶胶污染。气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系，其分散相为固体或液体小质点，大小为0.01-100微米，这些颗粒对于检测实验影响很大，其中对PCR的影响一直是让实验室人员头痛的一件事。PCR核酸检测灵敏度高，特异性强，对于诊断起着重要作用，但是稍不留神，在操作过程中容易受到气溶胶污染，导致结果不准确。

二、PCR实验室设计之分区隔离

如何减轻或避免气溶胶污染呢？

答案就在我们今天要讨论的主题：“为什么PCR实验室要分区隔离？”

为了得到准确的实验结果，在PCR实验室设计中，我们需要进行严格的实验分区：

（1）常规需要设置3个独立的分区：试剂耗材储存与准备区、样品处理和样品制备区，扩增检测区，各区域空间完全独立；实验室实施空气流向控制，扩增前和扩增后区域应具有独立的通风系统，扩增后区域保持负压状态，其他区域保持常压，防止扩增产物进入扩增前的区域。

（2）理想情况下需要四个独立分区：严格按照单一流向进行实验，即试剂准备区（1区）—样本制备区（2区）—扩增分析区（3区），严禁逆流，实验室内温度为15°C-30°C为合格范围等。

三、其他细节

其实，除了严格实验室功能分区以外，还有其他渠道可以减轻或避免气溶胶污染：

（1）确保实验室人、物及空气单向流动

在实验室设计中，核酸检测实验室的人、物及空气流向按照试剂储存和准备区→样本制备区→扩增和产物分析区，防止扩增产物随人流、物流及空气进入扩增前的区域。空气流向应按照从试剂储存和准备区→样本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。

（2）实验室检测安全管理

应当在生物安全二级实验室进行，并应在生物安全风险评估的基础上，采取适当的个体防护措施，包括手套、口罩和隔离衣等。应使用75%酒精进行桌面、台面及地面消毒，需要对实验室环境进行清洁，消除可能的核酸污染。

①实验室空气清洁。实验室每次检测完毕后，可采用房间固定和/或可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上。必要时可采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸。

②工作台面清洁。每天实验后，使用75%酒精进行台面、地面清洁。

③生物安全柜消毒。实验使用后的耗材废弃物放入医疗废物垃圾袋中，包扎后使用75%酒精喷洒消毒其外表面。手消毒后将垃圾袋带出生物安全柜放入实验室废弃物转运袋中。试管架、实验台面、移液器等使用75%酒精进行擦拭。随后关闭生物安全柜，紫外灯照射30分钟。

（3）物品专用：各区域只用于特定操作，不得从事其他工作，例如试剂、工作服、仪器、手套、标记笔等等均为该区专用，不得交叉使用。

（4）使用完的枪头，废液等，需要在专区进行处理。